DELLA ақуыздары сақталған шеберөсу реттегіштеріішкі және қоршаған орта белгілеріне жауап ретінде өсімдіктердің дамуын бақылауда орталық рөл атқаратын DELLA транскрипциялық реттеуші ретінде әрекет етеді және GRAS домені арқылы транскрипция факторларына (TFs) және гистон H2A-ға байланысу арқылы промоторларды нысанаға алу үшін тартылады. Жақында жүргізілген зерттеулер DELLA тұрақтылығының трансляциядан кейінгі екі механизм арқылы реттелетінін көрсетті: фитогормон гиббереллинімен индукцияланған полиубиквитинация, бұл оның тез ыдырауына әкеледі және оның жинақталуын арттыру үшін шағын убиквитин тәрізді модификаторлардың (SUMO) конъюгациясы. Сонымен қатар, DELLA белсенділігі екі түрлі гликозилдену арқылы динамикалық түрде реттеледі: DELLA-TF өзара әрекеттесуі O-фукозилдену арқылы күшейтіледі, бірақ O-байланысқан N-ацетилглюкозамин (O-GlcNAc) модификациясымен тежеледі. Дегенмен, DELLA фосфорлануының рөлі әлі күнге дейін түсініксіз, себебі бұрынғы зерттеулер фосфорлану DELL ыдырауын күшейтетінін немесе азайтатынын көрсететіндерден бастап, фосфорлану оның тұрақтылығына әсер етпейтінін көрсететін басқа зерттеулерге дейін қарама-қайшы нәтижелерді көрсетті. Мұнда біз РЕПРЕССОРДА фосфорлану орындарын анықтаймыз.ga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thaliana-дан масс-спектрометриялық талдау арқылы тазартылған және PolyS және PolyS/T аймақтарындағы екі RGA пептидінің фосфорлануы H2A байланысуын күшейтетінін және RGA белсенділігін арттыратынын көрсетті. RGA-ның нысана промоторларымен байланысы. Айта кету керек, фосфорлану RGA-TF өзара әрекеттесуіне немесе RGA тұрақтылығына әсер етпейді. Біздің зерттеуіміз фосфорланудың DELLA белсенділігін индукциялайтын молекулалық механизмін ашады.
DELLA функциясын реттеудегі фосфорлану рөлін анықтау үшін DELLA фосфорлану орындарын in vivo анықтау және өсімдіктерде функционалдық талдаулар жүргізу өте маңызды. Өсімдік сығындыларын аффинді тазарту және MS/MS талдауы арқылы біз RGA-да бірнеше фосфозиттерді анықтадық. GA жетіспеушілігі жағдайында RHA фосфорлануы артады, бірақ фосфорлану оның тұрақтылығына әсер етпейді. Маңыздысы, co-IP және ChIP-qPCR талдаулары RGA-ның PolyS/T аймағындағы фосфорлану оның H2A-мен әрекеттесуін және нысана промоторларымен байланысын күшейтетінін, фосфорлану RGA функциясын индукциялау механизмін ашатынын көрсетті.
RGA LHR1 қосалқы доменінің TF-пен әрекеттесуі арқылы хроматинді нысанаға алу үшін тартылады, содан кейін PolyS/T аймағы және PFYRE қосалқы домені арқылы H2A-мен байланысады, RGA-ны тұрақтандыру үшін H2A-RGA-TF кешенін түзеді. DELLA домені мен GRAS домені арасындағы PolyS/T аймағындағы Pep 2 фосфорлануы анықталмаған киназа арқылы RGA-H2A байланысуын күшейтеді. rgam2A мутантты ақуызы RGA фосфорлануын жояды және H2A байланысуына кедергі келтіру үшін басқа ақуыз конформациясын қабылдайды. Бұл өтпелі TF-rgam2A өзара әрекеттесулерінің тұрақсыздануына және rgam2A-ның нысана хроматинінен диссоциациялануына әкеледі. Бұл суретте тек RGA арқылы транскрипциялық репрессия көрсетілген. RGA арқылы транскрипциялық белсендіру үшін ұқсас үлгіні сипаттауға болады, тек H2A-RGA-TF кешені нысана генінің транскрипциясын күшейтеді және rgam2A депосфорлануы транскрипцияны төмендетеді. Сурет Huang және т.б.21-ден өзгертілген.
Барлық сандық деректер Excel бағдарламасын пайдаланып статистикалық талдаудан өтті, ал маңызды айырмашылықтар Стьюденттің t тесті арқылы анықталды. Іріктеме көлемін алдын ала анықтау үшін статистикалық әдістер қолданылмады. Талдаудан ешқандай деректер алынып тасталмады; эксперимент кездейсоқ таңдалмады; зерттеушілер эксперимент кезінде деректердің таралуына және нәтижелерді бағалауға мән бермеді. Іріктеме көлемі суреттің аңызында және бастапқы деректер файлында көрсетілген.
Зерттеу дизайны туралы қосымша ақпарат алу үшін осы мақаламен байланысты Табиғи портфолио есебінің аннотациясын қараңыз.
Масс-спектрометрия протеомикасының деректері ProteomeXchange консорциумына PXD046004 деректер жиынтығы идентификаторы бар PRIDE66 серіктес репозиторийі арқылы енгізілді. Осы зерттеу барысында алынған барлық басқа деректер Қосымша ақпаратта, Қосымша деректер файлдарында және Шикі деректер файлдарында ұсынылған. Бастапқы деректер осы мақала үшін берілген.
Жарияланған уақыты: 2024 жылғы 8 қараша