DELLA ақуыздары консервацияланған шеберөсу реттегіштеріішкі және қоршаған орта әсерлеріне жауап ретінде өсімдіктердің дамуын бақылауда орталық рөл атқарады. DELLA транскрипциялық реттеуші ретінде әрекет етеді және GRAS домені арқылы транскрипция факторлары (TFs) мен гистон H2A-мен байланысу арқылы мақсатты промоторларға тартылады. Соңғы зерттеулер DELLA тұрақтылығы екі механизм арқылы посттрансляциялық реттелетінін көрсетті: оның тез ыдырауына әкелетін фитогормон гиббереллинмен индукцияланған полиубиквитинация және оның жинақталуын арттыру үшін кішігірім убиквит тәрізді модификаторлардың (SUMO) конъюгациясы. Сонымен қатар, DELLA белсенділігі екі түрлі гликозилдену арқылы динамикалық түрде реттеледі: DELLA-TF өзара әрекеттесуі O-фукозилдену арқылы күшейтіледі, бірақ O-байланыстырылған N-ацетилглюкозамин (O-GlcNAc) модификациясы арқылы тежеледі. Дегенмен, DELLA фосфорлануының рөлі түсініксіз болып қала береді, өйткені алдыңғы зерттеулер фосфорлану DELLA деградациясына ықпал ететінін немесе төмендететінін көрсететін нәтижелерден бастап, фосфорлану оның тұрақтылығына әсер етпейтінін көрсететін басқа нәтижелерді көрсетті. Мұнда біз РЕПРЕССОРдағы фосфорлану орындарын анықтаймызga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thaliana-дан масс-спектрометриялық талдау арқылы тазартылған және PolyS және PolyS/T аймақтарындағы екі RGA пептидтерінің фосфорлануы H2A байланысуына және RGA белсенділігін арттыруға ықпал ететінін көрсетеді. Мақсатты промоутерлермен RGA ассоциациясы. Айта кету керек, фосфорлану RGA-TF әрекеттесулеріне немесе RGA тұрақтылығына әсер етпейді. Біздің зерттеуіміз фосфорлану DELLA белсенділігін индукциялайтын молекулалық механизмді ашады.
DELLA функциясын реттеудегі фосфорланудың рөлін түсіндіру үшін in vivo DELLA фосфорлану орындарын анықтау және өсімдіктерде функционалдық талдауларды жүргізу өте маңызды. Өсімдік сығындыларының жақындықты тазарту, содан кейін MS/MS талдауы арқылы біз RGA-да бірнеше фосфозиттерді анықтадық. ГА тапшылығы жағдайында RHA фосфорлануы артады, бірақ фосфорлану оның тұрақтылығына әсер етпейді. Маңыздысы, co-IP және ChIP-qPCR талдаулары RGA PolyS/T аймағындағы фосфорлану оның H2A-мен әрекеттесуіне және оның мақсатты промоторлармен байланысына ықпал ететінін, фосфорланудың RGA функциясын индукциялау механизмін ашатынын көрсетті.
RGA мақсатты хроматинге LHR1 қосалқы доменінің TF-мен әрекеттесуі арқылы алынады, содан кейін оның PolyS/T аймағы және PFYRE қосалқы домені арқылы H2A-мен байланысып, RGA-ны тұрақтандыру үшін H2A-RGA-TF кешенін құрайды. DELLA домені мен GRAS домені арасындағы PolyS/T аймағындағы Pep 2-нің анықталмаған киназа арқылы фосфорлануы RGA-H2A байланысуын күшейтеді. Rgam2A мутантты ақуыз RGA фосфорлануын жояды және H2A байланысуына кедергі жасау үшін басқа ақуыз конформациясын қабылдайды. Бұл өтпелі TF-rgam2A әрекеттесулерінің тұрақсыздануына және rgam2A-ның мақсатты хроматиннен диссоциациялануына әкеледі. Бұл сурет тек RGA делдалдық транскрипциялық репрессияны бейнелейді. H2A-RGA-TF кешені мақсатты геннің транскрипциясына ықпал ететін және rgam2A дефосфорлануы транскрипцияны төмендететінін қоспағанда, RGA-делдалдық транскрипциялық белсендіру үшін ұқсас үлгіні сипаттауға болады. Huang және т.б.21-ден өзгертілген сурет.
Барлық сандық деректер Excel бағдарламасының көмегімен статистикалық талдаудан өтті, ал маңызды айырмашылықтар Student's t тесті арқылы анықталды. Іріктеме көлемін алдын ала анықтау үшін статистикалық әдістер қолданылмаған. Ешбір деректер талдаудан шығарылған жоқ; эксперимент рандомизацияланбаған; зерттеушілер эксперимент кезінде және нәтижелерді бағалау кезінде деректерді таратуға көз жұмады. Үлгі өлшемі суреттің шартты белгісінде және бастапқы деректер файлында көрсетілген.
Зерттеу дизайны туралы қосымша ақпарат алу үшін осы мақаламен байланысты Табиғи портфолио есебінің аннотациясын қараңыз.
Масс-спектрометриялық протеомика деректері PXD046004 деректер жиынының идентификаторы бар PRIDE66 серіктес репозиторийі арқылы ProteomeXchange консорциумына жіберілді. Осы зерттеу барысында алынған барлық басқа деректер Қосымша ақпаратта, қосымша деректер файлдарында және өңделмеген деректер файлдарында берілген. Бұл мақала үшін бастапқы деректер берілген.
Жіберу уақыты: 08 қараша 2024 ж