Өсімдік және патогенді заттар
Құмайдың конверсиялық популяциясы (SCP) ретінде белгілі құмай қауымдастығының популяциясын картаға түсіруді Иллинойс университетінде (қазір Дэвис университетінде) доктор Пэт Браун ұсынған.Ол бұрын сипатталған және АҚШ ортасындағы өсімдіктердің өсуі мен дамуын жеңілдету үшін фотопериодқа сезімталдыққа және кішірек бойға айналдырылған әртүрлі сызықтардың жиынтығы болып табылады.Осы зерттеуде осы популяцияның 510 жолы пайдаланылды, дегенмен нашар өну және басқа сапаны бақылау мәселелеріне байланысты барлық үш белгіні талдауда барлық сызықтар пайдаланылмады.Сайып келгенде, хитин реакциясын талдау үшін 345 жолдан алынған деректер, flg22 реакциясы үшін 472 жол және TLS кедергісі үшін 456 жолдан алынған деректер пайдаланылды.B. CokeiLSLP18 штаммы Арканзас университетіндегі доктор Берт Блюмнен алынды.
MAMP реакциясын өлшеу
Бұл зерттеуде екі түрлі MAMP пайдаланылды flg22, (Genscript каталог # RP19986) және хитин .Құмай өсімдіктері жылыжайда топырақ толтырылған (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) төселген кірістірулерде өсірілді.Өсімдіктерді жинау күні жапырақтың қосымша ылғалдылығын болдырмау үшін үлгіні жинаудан бір күн бұрын суарды.
Жолдар рандомизацияланған және логистикалық себептер бойынша 60 жолдан тұратын партияларға отырғызылды.Әр жолға үш «құмыра» әр жолға екі тұқыммен отырғызылды.Келесі топтамалар алдыңғы топтама өңделгеннен кейін бүкіл популяцияны бағалағанға дейін отырғызылды.Екі сынақтың әрқайсысында қайта рандомизацияланған генотиптері бар екі MAMP үшін екі эксперименталды жұмыс жүргізілді.
ROS талдаулары бұрын сипатталғандай жүргізілді.Қысқаша айтқанда, әр жолға алты тұқым 3 түрлі құмыраға отырғызылды.Алынған көшеттерден біркелкілікке қарай үшеуі таңдалды.Көпшіліктен ерекше көрінетін немесе айтарлықтай биік немесе қысқа көшеттер пайдаланылмады.15 күндік үш түрлі құмыра өсімдігінің 4-ші жапырағының ең кең бөлігінен диаметрі 3 мм болатын төрт жапырақ дискісі алынып тасталды.Екі өсімдіктен бір жапыраққа бір диск және бір өсімдіктен екі диск, екінші диск суды басқару құралына айналады (төменде қараңыз).Дискілер 96 шұңқырлы қара пластинадағы 50 мкл H20 бетінде жеке жүзіп, жарық әсеріне жол бермеу үшін алюминий тығыздағышпен жабылған және түні бойы бөлме температурасында ұсталған.Келесі күні таңертең реакция ерітіндісі 2 мг/мл хемилюминесцентті L-012 (Wako, каталог № 120-04891), 2 мг/мл желкек пероксидазасы (VI-A түрі, Sigma-Oldrich, каталог № P6782) және 100 мг/мл хитин немесе 2 мкм Flg22.Осы реакция ерітіндісінің 50 мкл төрт шұңқырдың үшеуіне қосылды.Төртінші ұңғымаға MAMP қоспайтын реакция ерітіндісі қосылған жалған бақылау болды.Сондай-ақ әр пластинаға тек суы бар төрт бос құдық қосылды.
Реакция ерітіндісін қосқаннан кейін люминесценция SynergyTM 2 көп анықтағыш микропластинаны оқу құралының (BioTek) көмегімен әр 2 минут сайын 1 сағат бойы өлшенді.Пластинаны оқу құралы осы 1 сағат ішінде әрбір 2 минут сайын люминесценция өлшемдерін алады.Әрбір ұңғыманың мәнін беру үшін барлық 31 көрсеткіштің қосындысы есептелді.Әрбір генотип үшін MAMP реакциясының болжалды мәні (үш тәжірибелік ұңғыманың орташа люминесценция мәні — жалған ұңғыманың мәні) - бос ұңғыманың орташа мәнін алып тастағанда есептелді.Бос ұңғыманың мәндері үнемі нөлге жақын болды.
Жапырақ дискілеріНикотиана бентамиана, бір жоғары сезімтал құмай сызығы (SC0003) және бір төмен жауап беретін құмай сызығы (PI 6069) сапаны бақылау мақсаттары үшін әрбір 96 шұңқырлы пластинаға бақылау элементтері ретінде қосылды.
B. Cokeiегу дайындау және егу
B. Cokeiегу жоғарыда сипатталғандай дайындалды.Қысқаша айтқанда, құмай дәндері үш күн бойы суға малынған, шайылған, 1 литрлік конустық колбаларға салынып, 15psi және 121 °C температурада бір сағат бойы автоклавта жасалған.Содан кейін дәндер жаңа дақылдан алынған шамамен 5 мл мацерацияланған мицелиямен егілдіB. CokeiLSLP18 оқшауланады және 2 апта бойы бөлме температурасында қалдырылады, колбаларды әр 3 күн сайын шайқайды.2 аптадан кейін саңырауқұлақпен зақымдалған құмай дәндері ауада кептірілді, содан кейін егістік егілгенге дейін 4 ° C температурада сақталады.Бүкіл сынақ үшін бірдей егу қолданылды және жыл сайын жаңадан жасалған.Егу үшін 6-10 зақымдалған дәнді 4-5 апталық құмай өсімдіктерінің бұтасына орналастырды.Осы саңырауқұлақтардан алынған споралар бір апта ішінде жас құмай өсімдіктерінде инфекцияны бастады.
Тұқым дайындау
Құмай тұқымын алқапқа отырғызбас бұрын құрамында ~ 1% Spirato 480 FS фунгициді, 4% Sebring 480 FS фунгициді, 3% Сорпро 940 ES тұқымдық тазартқышы бар фунгицидпен, инсектицидпен және қауіпсіз қоспамен өңделген.Содан кейін тұқымдар 3 күн бойы ауада кептірілді, бұл тұқымдардың айналасында осы қоспаның жұқа қабатын қамтамасыз етті.Қауіпсіздендіргіш Dual Magnum гербицидін пайда болғанға дейінгі емдеу ретінде пайдалануға мүмкіндік берді.
Мақсатты жапырақ дақтарының төзімділігін бағалау
SCP 2017 жылдың 14–15 маусымында және 2018 жылдың 20 маусымында Клейтондағы Орталық дақылдар ғылыми-зерттеу станциясында әр жағдайда екі тәжірибелік қайталаумен рандомизацияланған толық блокты дизайнда отырғызылды.Тәжірибелер бір учаскеге 10 тұқымды пайдаланып, 0,9 м қатар ені 1,8 м бір қатарға отырғызылды.Шеттік әсерлердің алдын алу үшін әрбір эксперименттің шетіне екі шекара қатары отырғызылды.Тәжірибелер 2017 жылдың 20 шілдесінде және 2018 жылдың 20 шілдесінде егілді, бұл кезде құмай өсімдіктері өсу сатысында 3 болды. Бағалар бірден тоғызға дейінгі шкала бойынша алынды, мұнда ауру белгілерін көрсетпеген өсімдіктер тоғыз және толығымен бағаланды. өлі өсімдіктер бір деп есептелді.2017 жылы екі рейтинг және жыл сайын егуден кейін екі аптадан кейін 2018 жылы төрт көрсеткіш алынды.sAUDPC (аурудың өршу қисығы астындағы стандартталған аумақ) бұрын сипатталғандай есептелді.
Жіберу уақыты: 01 сәуір 2021 ж